如何做好全自动血球分析仪的质量控制 如何做血细胞分析标本的检测中的质量控制
学习报分析仪在检测血样本时，完全是由仪器按事先设定的程序自动进行测试的，因此必须进行严格的室内质量控制，以了解仪器运行过程中是否发生误差以及误差程度，若超过一定的范围必须查找原因，采取有效措施，以保证检验局俄国的准确性。第一。对操作人员上岗培训，是他们了解仪器的操作规，注意事项，引起实验误差的原因，警告的含义以及如何进行仪器维护等知识。第二。一起的鉴定和矫正，新仪器安装或仪器维修后，必须对一起的技术性能进行测试和评价，不符合者要用校准物进行校正，以确保仪器的完好，这对保证检验质量起到重要作用。第三。质控物物和质控图图的应用。质控物每天随每批标本一起测定，测得值会知道质控图上，若测得X±S范围内，说明学习报分析仪工作处于正常状态，若联系两次超过x±2S活一次超过X±3S则表示处于失控状态应找出原因,采取有效措施纠正.具体有关评价方法可参阅除了用质控物进行质量控制外,还可利用血细胞分析仪测得的MCV,MCH和MCHC三个平均值进行质控,因为出了严重贫血外,其他患者这三个平均值相当稳定,其中MCHC最为敏感。研究表明MCV为89.9fl.MCH为30.5Pg,MCHC为339g/L,故在日常工作中,每天可采用这三个平均值进行质控,如某一平均值连续三天＞3%或连续五天在2%~3%的便宜,即表明仪器失控.利用该法进行质控时,每天测定标本应在50份以上,并除去血液病,肿瘤化疗及婴儿活着的标本。
血细胞检测结果的准确性对疾病的诊断、 治疗 和监测有直接影响。因此，必须严把质量关，认真做好血细胞分析前、中、后的各项质量控制 工作。
1 分析前质量控制
1.1 血细胞分析仪的安装要求 为确保仪器的正常工作，安装时应注意:
1.1.1 仪器安放在远离电磁干扰源、热源的位置;
1.1.2 放置仪器的实验台要稳固，仪器两边、后部和上面空出至少0.5m的空间，以易于保养和使用，后板和墙壁间至少留出0.2m，以易于散热和清洗，工作 环境要清洁;
1.1.3 防潮、防阳光直射，通风条件好，室内温度应维持在15℃～30℃，最佳温度为25℃，相对湿度为30%～85%;
1.1.4 为了仪器安全和抗干扰，仪器 应用稳压器最好是净化电源，并连接符合标准的专用地线。仪器安装后或每次维修后，必须对仪器的技术性能进行测试、校准和评价。ICSH公布了对血细胞分析仪的评价方案，在对细胞计数和血红蛋白测定方面，要对仪器测试样本的总变异、携带污染率、线性范围、可比性、重复性、准确性进行评价。白细胞计数总变异系数应<3%，携带污染率<2%，重复性<3%，线性范围较宽，应在电阻抗法进行白细胞分群时应注意细胞分类结果与显微镜检查的符合性;
1.1.5 仪器的校准、仪器验收或仪器检修更换零件后或 临床使用半年后，必须进行一次校准。仪器校准是保证检测结果准确与否的关键步骤，须高度重视。校准用的标准物一是来自本仪器的配套标准物，二是来自新鲜人血（但定值要求直接或间接地溯源至国际标准）。校准时最好使用新鲜血作为校准物，采用间接溯源到国际标准的定值方法:一是在二级标准检测系统（即 参考 实验室）定值，二是在规范操作的检测系统即在使用配套试剂，用配套标准定期进行仪器校准规范地开室内质控，参加室间质评成绩优良，人员经过培训的仪器上定值，再按推荐校准方法一步一步地校准仪器。
2 分析中质量控制
2.1 每天开机时的检查： 开机后要检查仪器电压、气压等各种指标在仪器质检后是否在规定范围内，试剂量是否充足，若不足准备好替代试剂。环境温度是否达到仪器要求，本底测试是否通过，确保有足够的打印纸打印当天的样本数据等。
2.2 试剂： 血细胞分析仪的使用试剂一般分为稀释液、溶血剂和清洗剂3种，良好的试剂对保证仪器的正常运行和日常维护及获得准确的测试结果至关重要。
2.2.1 最好使用仪器的原装配套试剂，以保证测试结果的准确性，同时也保证仪器附件的正常使用和仪器寿命;
2.2.2 半自动血细胞仪严格掌握使用溶血剂用量及溶血时间，不同仪器溶血剂的用量及溶血时间有差异，溶血剂量不足或溶血时间过短，使细胞溶解不完全，时间太久可使血细胞明显变形，发生计数误差;
2.2.3 稀释液的渗透压、离子强度、电导率、pH值等指标应作为每批试剂验收的标准，绝对不允许使用过期稀释液。
2.3 标本要求： 测试时要检查血液标本有无凝块，仪器吸样前标本充分混匀，且混匀次数、方式要基本保持一致。
2.4 严格执行操作规程 操作规程是临床实验室的法规，人人必须遵守，不得擅自更改，并认真做好仪器日常的清洗，保养工作，同时做好记录。
2.5 受检者生理状态对实验结果的影响 ：注意避免由于生理状态引起的各参数的变化造成的偏差是质量控制的重要环节。如每天的早、中、晚的白细胞总数有一定的差别，一般下午较上午高，剧烈运动、情绪激动、严寒、暑热等使白细胞增多;新生儿白细胞总数明显增高;妊娠5个月以上及分娩时白细胞增多;服用某些药物也可干扰白细胞等，所以对非急诊患者应固定时间检查。 2.6 注意仪器的报警、提示：
2.6.1 堵孔，仪器会出现波形或出现报警声，指示灯闪烁或提示警告信号（CLOG），应找出原因，及早解除，使仪器回复运转。
2.6.2 血细胞分析仪在检测过程中，标本有异常细胞及非典型细胞时，有的仪器白细胞散点图异常，有的白细胞直方图异常可在 报告单上或屏幕上或用警告信号（-、-、-或***或Aty/Abn-LY、IMM Gran等）提示出某个区域有异常细胞。种类不同仪器报警方式不同，此时要作显微镜下分类。
3 分析后质量控制
3.1 保留标本备查:血样标本测试完毕，标本应在室温保留至少一天，以备 临床医师对检查结果有疑惑时复查，核对时用。
3.2 重视室内质控，每天坚持做1～2次质控，检查当日质控物各参数是否在规定范围内，只有在质控时才允许检测病人标本。
3.3 发出实验结果之前，应由检验师或主管检验师严格审核报告单，查看各参数是否与临床诊断相符，数据间是否有矛盾及各参数之间的 联系，仔细观察直方图、散点图的变化以确定实验结果可否鉴别，是否需要复查或重采标本。
3.4 加强与临床科室联系，若报告结果超出生理变化范围，并与诊断结果不符，要及时与临床医师取得联系，对检验结果做出合理的解释，这就要求检验 工作者也应具备一定的临床基础知识。
3.5 积极参加室间质量控制，通过参加室间质评可以将自己的血细胞分析仪的准确度与精密度和同类仪器进行比较，及时发现问题，有利于保证血细胞检测的质量。认真做好血细胞分析前、中、后的质量控制，保证检验结果准确、及时、可靠，可以为临床提供病人的相关资料，为临床诊断和 治疗 提供精确的 科学 依据，指导临床合理用药。
1重视仪器的日常维护、保养,使仪器处在最佳工作状态。o上班前,下班后,首先要搞好室内卫生,进实验室要换鞋,无关人员不得进实验室,尽量减少灰尘的污染。?操作人员对仪器的说明书要仔细阅读,对仪器的原理、操作规程、使用注意事项、细胞分布直方图的意义、异常报警的含义、引起实验误差的因素及仪器维护等要有充分了解,业务知识要扎实,操作熟练,工作责任性强。?抗凝剂的选择也是一个十分重要的因素,不同的抗凝剂有不同的结果(表1)直接影响到仪器测定的结果。通过实验,肝素、双草酸盐、枸缘酸钠不能用于血球分析仪的抗凝剂。而EDTA-K2、EDTA-K3、EDTA-Na2做血球分析仪的抗凝剂是比较理想的,不影响白细胞数目及大小,对红细胞的形态也影响最小,而且可以抑制血小板的聚集。EDTA-Na2价格低廉,但其溶解度较低,不适用于小试管内做抗凝剂,因为小的试管不能充分混和,容易造成血液凝固(在大的试管内可以做血液分析仪的抗凝剂用)。EDTA-K2、EDTA-K3溶解度高,不会出现血液凝固,所以我们日常工作中适用EDTA-K2或ED-TA-K3做血球分析仪的抗凝剂,一般的用量为1.5～2mg抗凝剂可使1ml血液不凝固。?我们使用的采血容器都是真空采血系统,血和抗凝剂充分混和,血样无凝块,这样既可使血液分析达到自动化,又可进行质量控制和保证操作者的安全。通常在采血后4小时内检查结果。?所用的试剂必须合格,我们使用仪器配套的试剂,包括稀释液、溶血剂,清洗液等。如果使用国内生产的或自制的试剂,其电导率、渗透压、pH、直方图等主要技术指标也尽可能和进口配套试剂相同,才能保证仪器测定的准确性。
2 实验中的质量控制
每天仪器开机后,仪器进行自检,首先进行试剂空白计数,要求WBC=0、RBC=0、PLT<5×109/L、HB=0。正常时采用原厂配套的质控物进行测定,在质控范围内才能进行标本测定。血液分析仪质量控制程序见图1。我们购买原仪器厂或经国家批准的实验室的定值物,每天绘制常规工作质控图,监测工作质量。以测定结果为纵坐标,测定日期为横坐标,首先把纵坐标居中的位置定为靶值(T),从此点作出一条与横轴平行的直线称为靶值线。然后分别在纵轴上下定出允许误差的警告界限和最大允许限的上下四个点,再分别通过四个点作出四条平等于靶值线的直线,分别称为警告界限和最大允许界限。每天开机后,先测一次定值标本,要求全部定值物的值都应落在最大允许范围内,才能进行标本测定。有时我们采用每日上午取正常人标本一份,重复测定5次,取其均值为靶值,作为质控物。当测定到15～20份标本后,重复测定一次质控物与靶值相比较,并按下列规则决定是否失控:WBC±0.3×109/L、HB±2g/L、MCV±2fL、MCH±1.5pg、MCHC±1.5%。凡上下波动超过上述范围者为失控,本法较为简便易行。
3 实验后的质量控制
在前面工作基础上打出病人结果是否准确可信、有无堵孔、吸量准确否、仪器稀释度如何等,审查报告结果是十分重要的,判断是否需要重复检查或手工操作是质控的最后一关。1看图形、曲线形态的位置。看白细胞和血小板判断有无血小板凝块,看血小板图判断有无干扰、污染、红细胞破坏。o成批化验单看,当日病人标本的各项数值的均值应保持在一定的范围内。?看白细胞、红细胞、血小板三总数结合诊断,综合判断结果正误。三者都低是否因为吸量不足或稀释有误。微孔是血球分析仪的关键部分,也是最易发生堵孔故障的。当仪器半堵孔时,得出结果数值偏低很多,这种情况仪器无任何提示,微孔半堵情况完全靠操作者判定。?白细胞图与总数及分类值要对照分析,需要时标本可涂片镜检。?红细胞和血小板数对比,通过相互参比判断两值可信度:RBC高或正常,PLT低者可信;RBC、PLT都低可疑有堵孔;RBC低、PLT高或正常可疑看诊断。?各报告中异常指示我们均能解释,整张化验单与诊断对比要相符。细胞直方图既给临床提供诊断数据,也为操作者提供对仪器工作状态和实验结果是否可信的监控。必须在仔细分析直方图后确定是否需要显微镜的检查,再发出报告,这一点在细胞分类计数中更为重要。
1 实验前的质量控制
1重视仪器的日常维护、保养,使仪器处在最佳工作状态。o上班前,下班后,首先要搞好室内卫生,进实验室要换鞋,无关人员不得进实验室,尽量减少灰尘的污染。?操作人员对仪器的说明书要仔细阅读,对仪器的原理、操作规程、使用注意事项、细胞分布直方图的意义、异常报警的含义、引起实验误差的因素及仪器维护等要有充分了解,业务知识要扎实,操作熟练,工作责任性强。?抗凝剂的选择也是一个十分重要的因素,不同的抗凝剂有不同的结果(表1)直接影响到仪器测定的结果。通过实验,肝素、双草酸盐、枸缘酸钠不能用于血球分析仪的抗凝剂。而EDTA-K2、EDTA-K3、EDTA-Na2做血球分析仪的抗凝剂是比较理想的,不影响白细胞数目及大小,对红细胞的形态也影响最小,而且可以抑制血小板的聚集。EDTA-Na2价格低廉,但其溶解度较低,不适用于小试管内做抗凝剂,因为小的试管不能充分混和,容易造成血液凝固(在大的试管内可以做血液分析仪的抗凝剂用)。EDTA-K2、EDTA-K3溶解度高,不会出现血液凝固,所以我们日常工作中适用EDTA-K2或ED-TA-K3做血球分析仪的抗凝剂,一般的用量为1.5～2mg抗凝剂可使1ml血液不凝固。?我们使用的采血容器都是真空采血系统,血和抗凝剂充分混和,血样无凝块,这样既可使血液分析达到自动化,又可进行质量控制和保证操作者的安全。通常在采血后4小时内检查结果。?所用的试剂必须合格,我们使用仪器配套的试剂,包括稀释液、溶血剂,清洗液等。如果使用国内生产的或自制的试剂,其电导率、渗透压、pH、直方图等主要技术指标也尽可能和进口配套试剂相同,才能保证仪器测定的准确性。
2 实验中的质量控制
每天仪器开机后,仪器进行自检,首先进行试剂空白计数,要求WBC=0、RBC=0、PLT<5×109/L、HB=0。正常时采用原厂配套的质控物进行测定,在质控范围内才能进行标本测定。血液分析仪质量控制程序见图1。我们购买原仪器厂或经国家批准的实验室的定值物,每天绘制常规工作质控图,监测工作质量。以测定结果为纵坐标,测定日期为横坐标,首先把纵坐标居中的位置定为靶值(T),从此点作出一条与横轴平行的直线称为靶值线。然后分别在纵轴上下定出允许误差的警告界限和最大允许限的上下四个点,再分别通过四个点作出四条平等于靶值线的直线,分别称为警告界限和最大允许界限。每天开机后,先测一次定值标本,要求全部定值物的值都应落在最大允许范围内,才能进行标本测定。有时我们采用每日上午取正常人标本一份,重复测定5次,取其均值为靶值,作为质控物。当测定到15～20份标本后,重复测定一次质控物与靶值相比较,并按下列规则决定是否失控:WBC±0.3×109/L、HB±2g/L、MCV±2fL、MCH±1.5pg、MCHC±1.5%。凡上下波动超过上述范围者为失控,本法较为简便易行。
3 实验后的质量控制
在前面工作基础上打出病人结果是否准确可信、有无堵孔、吸量准确否、仪器稀释度如何等,审查报告结果是十分重要的,判断是否需要重复检查或手工操作是质控的最后一关。1看图形、曲线形态的位置。看白细胞和血小板判断有无血小板凝块,看血小板图判断有无干扰、污染、红细胞破坏。o成批化验单看,当日病人标本的各项数值的均值应保持在一定的范围内。?看白细胞、红细胞、血小板三总数结合诊断,综合判断结果正误。三者都低是否因为吸量不足或稀释有误。微孔是血球分析仪的关键部分,也是最易发生堵孔故障的。当仪器半堵孔时,得出结果数值偏低很多,这种情况仪器无任何提示,微孔半堵情况完全靠操作者判定。?白细胞图与总数及分类值要对照分析,需要时标本可涂片镜检。?红细胞和血小板数对比,通过相互参比判断两值可信度:RBC高或正常,PLT低者可信;RBC、PLT都低可疑有堵孔;RBC低、PLT高或正常可疑看诊断。?各报告中异常指示我们均能解释,整张化验单与诊断对比要相符。细胞直方图既给临床提供诊断数据,也为操作者提供对仪器工作状态和实验结果是否可信的监控。必须在仔细分析直方图后确定是否需要显微镜的检查,再发出报告,这一点在细胞分类计数中更为重要。
4 小结
总之,搞好血球分析仪的质量控制工作,单日质控物进行质控只能监测某一时刻的测定状态,往往不能代表整个测定过程的情况;而用病人结果质控不能表示具体时刻的测定状况。最佳质控方法是采用质控物避免系统误差,通过结果审查,避免偶然误差。同时要搞好血球分析仪的质量控制,除上述外,最重要的一点是要提高检验者的业务能力和责任心,工作质量及人员素质是决定因素。只要工作人员能做到在实验前、实验中、实验后都能搞好质量控制,才能搞好血球分析仪的质量控制工作。
